加入逆转录酶,四种脱氧核苷酸,能量(或者dNTP)就可以啦


是想通过cDNA获得DNA的序列?重新理解了一下,大概理解了题主的意思……其实很简单,把序列放到NCBI上blast一下就什么信息都有了……


①楼上逆转录什么鬼,cDNA跟逆转录有啥关系……以下回答来源于学生科的朋友

②一般来说,先测cDNA的分子量,确定一下大概的脱氧核苷酸数,避免无法确定重序列的个数这种翻车现场

③然后,用一种限制性内切酶将cDNA切断,测出其碱基序列

④换一种限制酶,重复③的操作N次

⑤把所有测出来的碱基序列丢进资料库,由电脑确定可行性,可行性最大的就是cDNA的DNA序列了

【生科朋友吐槽:运气很重要】


这个问题是个问题?都已经是DNA了还要得到它?不好好珍惜? 我只能理解成已知DNA序列,如何得到它了,,,PCR、基因文库、化学合成都可可


由mRNA逆转录的cDNA获得原DNA全长序列已经有多种方法 比如经典的RACE技术,染色体步移法和同源克隆法等。方法给了具体原理和操作太多想进一步了解可以百度。一般都是用race技术,老师重点教的也是这个。

也可以直接去到资料库--美国国立生物技术信息中心(NCBI)的GenBank--中用在线版的局部比对基本查询工具(Basic Local Alignment Search Tool,BLAST)搜索全基因组


cDNA的反向互补序列,即是对应的DNA序列。可以直接用软体完成,比如Clone manager,SnapGene viewer等。


推荐阅读:
相关文章