加入逆轉錄酶,四種脫氧核苷酸,能量(或者dNTP)就可以啦


是想通過cDNA獲得DNA的序列?重新理解了一下,大概理解了題主的意思……其實很簡單,把序列放到NCBI上blast一下就什麼信息都有了……


①樓上逆轉錄什麼鬼,cDNA跟逆轉錄有啥關係……以下回答來源於學生科的朋友

②一般來說,先測cDNA的分子量,確定一下大概的脫氧核苷酸數,避免無法確定重序列的個數這種翻車現場

③然後,用一種限制性內切酶將cDNA切斷,測出其鹼基序列

④換一種限制酶,重複③的操作N次

⑤把所有測出來的鹼基序列丟進資料庫,由電腦確定可行性,可行性最大的就是cDNA的DNA序列了

【生科朋友吐槽:運氣很重要】


這個問題是個問題?都已經是DNA了還要得到它?不好好珍惜? 我只能理解成已知DNA序列,如何得到它了,,,PCR、基因文庫、化學合成都可可


由mRNA逆轉錄的cDNA獲得原DNA全長序列已經有多種方法 比如經典的RACE技術,染色體步移法和同源克隆法等。方法給了具體原理和操作太多想進一步瞭解可以百度。一般都是用race技術,老師重點教的也是這個。

也可以直接去到資料庫--美國國立生物技術信息中心(NCBI)的GenBank--中用在線版的局部比對基本查詢工具(Basic Local Alignment Search Tool,BLAST)搜索全基因組


cDNA的反向互補序列,即是對應的DNA序列。可以直接用軟體完成,比如Clone manager,SnapGene viewer等。


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