生物标记包含DNA、RNA以及蛋白质，可用于分析细胞的功能、临床疾病诊断并且帮助医生选择治疗方式。其中，用以评估个体动态基因表达的改变，RNA为最理想的指标^[1]。

    在检测技术日新月异，过去原位RNA检测技术（ISH和FISH）已发展多年，但这些技术在特殊检体上还是有许多的局限存在。例如它们缺乏可靠性和灵敏度，用以准确地检测大多数人类基因的表达。此外，微阵列(Microarray)与PCR技术是常用于分子诊断分析的标准分子检测方法，但是在这些技术最大的问题就在于只能侦测含量多寡，但无法侦测整体细胞或组织的临床信息以及表达分布情形。

    为解决这些问题，ACD (Advanced Cell Diagnostics Inc., Hayward, CA)开发了RNAscope®  in situ hybridization (ISH)，透过独特探针和放大信号的新型核酸原位杂交染色技术，可以取代传统ISH/FISH RNA原位检测 ^[2]，此技术几乎能够设计出所有物种的目标探针并且提供性能的保证，而其探针制造只需要两周以内的时间，比起全新抗体制造，所需要的时间少了很多，另外，透过双Z探针设计，RNAscope® ISH能够放大讯号提高侦测灵敏度并且降低来自非特异性杂交的背景干扰^[1]。

RNAscope® ISH的操作原理及步骤如下^[2]：

1、透化

利用RNAscope® ISH试剂盒中的kit预先处理载玻片上已固定好的细胞或组织检体，使其暴露出目标RNA，以利探针辨识。

2、探针杂交

RNAscope® ISH设计双Z探针目标探针，能与目标RNA做杂交反应。

3、信号放大

通过信号扩增序列与显色探针(Label Probe)标记，相互反应并互补结合进而扩大侦测信号，提高侦测灵敏度。

4、影像显影

透过光学显微镜或多光谱成像系统的侦测下，呈现不同细胞中每一个目标RNA分子的讯号，一个目标RNA呈现一个点状信号。

5、量化分析

在显微镜下直接量化计数或使用专门量化软体RNAscope® SpotStudio™或HALO自动化图像分析，量化每一个细胞中的RNA分子信号。

利用RNAscope®得到的染色结果

图一、视觉化并量化多个检查点和免疫细胞标记物的表达

图二、可用于评估药物安全性，药物与基因表达间的关联性

图三、RNAscope® ISH合并IHC在人类肺癌的染色结果，PPIB阳性对照mRNA(探针红色)，CAM5.2酸性细胞角蛋白(绿色萤光)，DAPI作为对比染色(蓝色萤光)

图四、在著名的国际期刊Nature Communications中，利用RNAscope® ISH的染色结果

统整RNAscope®的优点^[3]：

1.应用性广泛

可应用于各个领域的实验，并供超过15000万种以上的探针选择(包含140种物种以上)

2.同一检体中侦测多种目标RNA

透过不同设计的探针，同时侦测不同目标基因的表现及其之间的关联性

3.高灵敏度及特异性

独家专利设计的双Z探针设计，搭配放大讯号系统，增加灵敏度及特异性

4.不需要RNase-free的操作环境与过程

与IHC实验流程类似并且可以合并使用，同时侦测目标RNA与蛋白质间的变化情形

5.任何基因及组织都适用

只需要两周的时间，即可得到客制化的探针，不用像全新抗体需要拢长的制备时间

    RNAscope® ISH的特色以灵敏度和特异性而闻名，目前已成为一项经过验证的技术，在超过850多个研究文献中被使用。ACD提供全面的药物检测服务和相关产品，能检测140多种物种，并且超过15,000种目标分子的检测试剂、附件和目录探针。

    RNAscope®ISM可以检测几乎所有RNA分子生物标志物，具有单分子灵敏度和组织特异性。它提供了一种通用的解决方案，以高度特异和敏感的方式分析药物靶标和生物标记物的组织分布，而无需耗时的抗体开发和验证，提供一个快速及简便的RNA原位侦测方式。

 

参考文献：

1. Advanced Cell Diagnostics, Inc. https://acdbio.com

2. 北京友谊中联生物科技有限公司http://t.cn/E2ScZFx

3. 弘晋有限公司http://t.cn/E2Sts4y