最近在饲料中提纯枯草芽孢杆菌，老师说菌种要90℃水浴10分钟再涂布，但是每次都没有菌种长出来，该怎么办？

后来我试了一下，不水浴，直接涂布，是可以长出菌落的，这是为什么呢？

呃芽孢杆菌的话90摄氏度可以很有效的杀死杂菌还有大部分的芽孢杆菌的菌体

可以这么试试看

饲料提取物可以先用培养基（LB之类的就可以）摇24小时温度调高一点 45 50的话很多芽孢杆菌是能正常生长的大肠神马的就烫死了然后超浓的菌悬液（OD600肯定不止1.5了感觉黏糊糊的）放90摄氏度或者沸水加热十分钟这个条件下基本上除了孢子没啥能活下来用做PCR那种低俗的微离转一下让上层变成半透明那个可以冻存一部分（孢子能耐冷冻）剩下的再涂板啥的

涂板前要稀释

涂板前要稀释涂板前要稀释以上加油

嗯~首先，你得确定不水浴培养出来的菌落是不是枯草芽孢杆菌，毕竟饲料里提出的嘛，然后枯草芽孢杆菌可能美美的生活在一个物质丰富的环境里，没有产生芽孢，于是本身数量就不是很多，60度底下长期耐受，100度的时候两分钟就损失5%以上，所以十分钟可能已经死光光啦。当然还有PH不造你调好没有，不过按说这菌2.2-7.0都行毕竟比较好养活。

总之我猜呢，最有可能的是老师要求的是90度十分钟杀死其他的菌，然后枯草芽孢杆菌可以产生芽孢抗逆性强，就活下来啦，可是饲料实在是太美味了它们忘记了长芽孢2333我就不罗嗦了。

你的实验不会就是提纯一下枯草芽孢杆菌就完了吧？肯定还有进一步的实验。提纯这一步应该不是什么太特殊的没人做过的实验，那么可以查查文献看看别人怎么做的，尤其是外文文献。另外，不水浴长出来的菌落，是一种还是好多种？如果是一种，可以鉴定一下是不是你要的（形态、颜色、DNA......）。不是我的专业，瞎想的，呵呵。做实验，尤其探索性的实验，具体步骤不一定要完全听老师的，我做实验那会儿，老板只是给个题目，自己查资料，自己写实验方案，开题通过以后自己做，有问题问她她也只是给点大框架的意见，具体解决方案还是自己搜。当时觉得很累，现在想想，还是蛮锻炼人的。

或者可以再设置几个温度和时间试试 80度10min之类

首先要搞清楚加热90℃是为了杀死其他菌群，但是枯草芽孢杆菌到90℃也不容易存活，只有芽孢可以存活，当你涂板时没死的应该是芽孢，所以只能说明这个饲料里的芽孢量比较少而不能说明没有枯草芽孢杆菌。我们之前做有机肥也遇到过这种情况，如果你想计数就用DNA含量法几个数，或者用DGGE看一下饲料里的菌群分布。如果你想把里面的枯草芽孢杆菌筛出来，那只能增加涂布浓度了。我做过土壤中芽孢杆菌的筛选，90℃10min是可以筛出芽孢杆菌的，祝你好运

首先，如果饲料中确实是存在枯草芽孢杆菌那么水浴10分钟后再进行涂布培养是可以长出菌的因为芽孢杆菌具有很强的抗逆性如短时间的高温那么你说的你这样操作后没有菌那么说明几个问题：1）饲料样品中的芽孢菌没有或很少；2）你的培养基是否选择正确，一般用牛肉膏蛋白胨培养基；3）你的稀释梯度是否正确。

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如果你不水浴进行涂布有菌落出现那么你要搞清楚这些菌落是什么菌因为饲料本身会有一些杂菌如果要长出芽孢杆菌是一定要进行水浴的

谢邀。没做过芽孢杆菌，一直也没敢来答。今天下午镜检一个环境样品的时候看到疑似游离芽孢的东西，想起来跟题主探讨一下。非常赞同楼上两位的回答，想要初步看一下到底有没有形成芽孢的话，除了用专门的染料孔雀绿，也可以试试用结晶紫简单染色，如果能看到细胞内有著色较浅近透明的颗粒，或者在细胞外有较小的折光的颗粒，基本上应该可以放心地90℃水浴了。如果没有，那可能确实是饲料太美味233个人认为，第一次失败会不会是因为样品稀释倍数太大或者不均匀。。。杂菌的问题，其实只要目的菌株长出来了，挑单菌落纯化几次就好了吧。