色谱柱的填充和老化
要制备一根分离效能较高的色谱柱，必须在载体上涂上一层薄而均匀的液膜，再把涂好的固定相均匀而紧密地装填到色谱柱管内。因此，固定液的涂渍和色谱柱的装填使色谱分析重要操作技术之一。这里主要介绍填充柱。
1、 色谱柱管的试漏和清洗
由于存放、运输等过程可能将色谱柱管沾污或损坏，使用前应将色谱柱进行试漏与清洗。
试漏的操作方法很简单，只要将柱管全部浸入水中，将其出口填死，入口通入氮气，在高于使用的操作压力下，以壁管没有气泡冒出为合格。
清洗的方法，因柱管的材料不同而异。
（1）
玻璃柱管可注入清洗液浸泡两次（必要时使用温热的清洗液，效果更好），然后用子来水冲至中性，再用蒸馏水清洗。清洁的玻璃管内壁不应挂有水珠，否则还要用温热的清洗液洗涤，洗后用自来水冲至中性，再用蒸馏水清洗，烘干后备用。
（2）
对于不锈钢柱管，可用5——10%的热碱（NaOH或KOH）水溶液抽洗4——5次，以除去壁内的油污，然后用自来水冲洗至中性，再用蒸馏水清洗，烘干后备用。
（3）
对于铜柱管，可采用10%的盐酸浸泡，并用水泵抽洗，直至抽洗液中无金属铜锈或其他悬浮杂质为止，然后用自来水冲至中性，再用蒸馏水清洗，烘干后备用。
（4）
对于已经用过的色谱柱，需要重换其固定相时，柱管也应当用相应的溶剂（如乙醚、乙醇、热碱液）依次洗涤，自来水冲至中性，然后用蒸馏水清洗，以除去柱管中的载体粉末及粘附在管壁上的固定液膜，烘干后备用。
2、 固定液的涂渍要求
为在载体上涂渍一层薄而均匀的液膜，首先要选好能溶解固定液的溶剂，确保固定液完全溶解，不能有悬浮物，溶剂的本身不应造成检测器的污染；其次，由于载体强度不高，需避免在涂渍中因搅拌或过筛损坏液膜；第三，如要载体表面或其孔中存有空气，影响固定液渗入时，可以采用减压方法，使固定液均匀涂敷在载体表面上。
下面介绍几种常用的涂渍方法：
（1）「常规」涂渍法。对配比大于5%以上（所谓配比，即固定液与载体的重量比）的固定液，可用「常规」涂渍。其方法是：将一定量的固定液放置在一蒸发皿中，加入适量的溶剂，待固定液溶解后，再加入定量的载体。在一般实验室的条件下，固定液可借助溶剂作用涂敷在载体表面上。例如：10%鲨鱼烷固定相的制备即可采用「常规」涂渍法。在粗天平上称取3g的鲨鱼烷放在蒸发皿中，在通风柜中加入能保证完全浸没载体的乙醚溶剂，使3g鲨鱼烷完全溶解后，再徐徐加入30g60——80目的6210载体，固定液在溶剂的作用下涂敷在载体表面上。最后把涂渍上固定液的载体在红外灯下轻轻搅拌，烘干并赶走溶剂。一般要求，烘干后的固定相基本不应有溶剂气味，这样才可装入色谱柱老化后使用。
对于配比高的固定液，「常规」法完全可以满足其涂渍要求，因为在高温老化时，固定液还有重新均匀分布的机会。但对于配比小于3%的固定液，由于固定液含量少，刚刚铺盖其载体表面时，如果涂渍不均匀，老化也不能完全解决问题，只能采用下述两种方法涂渍。
（2）抽空盘涂法。在一个蒸发皿或一个盘中，称取一定量固定液，加入适量的溶剂（合适的量可以按下表大致求出），待其完全溶解后，再加入一定量的载体，将器皿置于真空干燥器中，接水泵抽空5min，脱气，然后取出放在通风柜中，让溶剂自然蒸发或红外灯下烘干，不要搅拌也不要过筛。
各种载体与所需溶剂量
载体 每克载体所需溶剂量
红色载体 红色载体
1.5ml 2.0ml
例如，配制20g红色载体的固定相，需要溶剂的量为20?1.5=30ml。
（3）抽空蒸发法。将一定量的固定液置于圆底烧瓶中，加入适量溶剂，待完全溶解后加入一定量的载体。烧瓶接水泵，并放在水浴上或红外灯下，一边抽一边加热，可以定时摇动烧瓶使溶剂蒸发至干，然后装柱使用。
3、 色谱柱的填充
固定相填充的好坏，将直接影响柱能效。通常采用泵抽填充法，即把色谱柱的尾端（注意，即接检测器的那一端塞上脱脂棉，再接真空泵，色谱柱的前端（即接汽化室的那一端））再接上一个漏斗。在真空的抽提下，不间断地从漏斗中倒入要装的固定相，并不断轻轻敲打色谱柱管，直至固定相不再进入主管为止。装好的色谱柱两头均应按要求堵塞石英棉或硅烷化的玻璃棉，在不影响样品分析的条件下也可用清洁的钢网填塞。
4、 色谱柱的老化
装填好的色谱柱还需要进行老化处理后，才能接至检测器使用。老化的目的有两个：（1）为了彻底除去固定相中残余溶剂和某些挥发性杂质，确保检测器不收污染，使之有较低的本底电流；（2）进一步促使固定液均匀地、牢固地分布在载体表面上，可以提高柱效能。老化的方法是：把色谱柱接入载气气路系统（为安全起见，一般采用氮气作载气），色谱柱的一端接在汽化室上，另一端放空（不要接在检测器上，防止沾污），用10——20ml/分的载气流速，略高于操作温度10°C—20°C（但要低于固定液的最高使用温度极限）的条件下，通气4—8h甚至24h。基本老化好后，再接上检测器检查。当记录仪基线平直以后，老化过程才算结束。千万注意，上述老化色谱柱的接法，不适用于以氢气作载气老化，否则氢气放空在色谱炉中易发生爆炸事故。
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