稳定转染细胞时，质粒总是丢失，大家有什么解决方案吗？

用质粒稳定转染细胞时，质粒总是丢失，流式细胞仪检测无信号，大家有什么解决方案吗？

不存在稳定转染这一说法，正确表述为「构建xx稳定表达细胞系」。转染是一个过程，稳定转染是在瞬时转染的基础上产生的，由于转入细胞核的质粒有很小的概率整合进宿主的基因组中，所以可以用一些抗生素将这种细胞筛选出来并扩大培养，由于质粒稳定的进入了基因组，所以效果稳定存在。慢病毒载体，只有与辅助载体（包装载体）共转染才有可能整合到细胞基因组中，从而稳定表达。最好是加puro药筛后，种96孔板，筛选出单克隆细胞。单个细胞生长起来的，性状稳定，不存在质粒丢失一说。如果是未经筛选的细胞，传代过程中，目的细胞增殖没有正常细胞快，所占比例越来越低，让人产生质粒丢失的错觉。

加选择压

你流式检测的什么指标？也可能转进去但是没表达呀。。。问题太宽泛了，问个问题不能严肃认真点嘛

可否具体一些说一下你用的什么方法什么细胞转的什么质粒？

lipofectamin 2000，电转，病毒，病毒+lentiX。

一个一个试过去吧。

是不是改变细胞通透性的溶液稀释程度过大，所以植入目的基因的噬菌体无法进入细菌，得不到你想要的目的基因。该病毒在人为创造条件下是否有逆转录的可能，也有可能是该真核细胞内有抑制病毒逆转录的因子。

病毒感染