創傷性腦損傷(TBI)是指由於外部機械力的作用導致大腦的損傷。腦外傷倖存者遺留下的短暫或永久的軀體功能障礙、認知障礙以及心理障礙是臨床工作中經常遇到的問題。為了更好的研究這些問題的發病機制,了解路腦外傷病理生理過程,並制定出新的治療方法,建立良好的動物模型顯得至關重要。雖然較大的動物在體型和生理上與人類更接近,但由於嚙齒類動物模型低成本,佔用空間較小以及對結果易於進行評估。在大鼠的實驗動物模型中,打擊型致傷機制通過可控性的外力來調節對大腦造成的損傷程度,進而量化研究不同損傷情況下的病理生理機制,對指導治療和預後評估更有意義。其中3種模型應用較廣泛:落體打擊模型,液壓腦損傷模型,控制性皮質撞擊模型。

本實驗主要採用的Feeney落體打擊模型進行造模,該模型造模前需要手術暴露完整的硬腦膜,落體打擊作用於完整的硬腦膜,造成皮質挫傷,損傷的嚴重程度通過改變落體重量和高度來調節。可以複製出人類腦外傷中的腦震蕩、腦挫裂傷、外傷性軸索損傷、腦出血等病理改變。該模型優點:實驗可控,可複製分級腦損傷;實驗可重複性,相同致傷外力組內各只動物所受腦損傷程度、範圍及腦損傷病理生理反應基本一致;實驗作用外力參數可調、易控制,實驗動物選擇範圍也較多。

SD大鼠腦外傷動物模型的建立

按自製改良的Feeney』s自由落體方法(由腦立體定位儀、固定架、帶孔的光滑不鏽鋼導管、下落砝碼、T型撞桿、擋片組成,使用時擋片插入一定高度的不鏽鋼導管內,放入砝碼,T型撞桿置於硬腦膜上,迅速拔出當擋片砝碼以自由落體的速度撞擊T型撞桿,後者直接打擊硬腦膜,造成顱腦損傷模型)製作大鼠重型顱腦損傷模型。

造模前,大鼠禁食8h;大鼠經稱重,用7%水合氯醛麻醉(0.5ml/100g),如果不禁食,術後很容易引起大鼠腹脹氣。用剃毛刀理去大鼠頭頂的毛髮,進行備皮,碘伏常規消毒後,於矢狀正中切開頭皮,長約3-4cm。

開創後用兩個動脈夾分別夾住切口兩側,利用動脈夾的重力撐開使顱骨暴露。剝開軟組織,剝離骨外膜,暴露左側頂骨,在冠狀縫後1.5mm,中線旁左側2.5mm處(根據不同客戶的需求進行定位),用高速顱骨鑽鑽1個小孔,並擴大為直徑5mm的骨窗,保持硬腦膜完整。注意事項有如下幾點:1 骨外膜必須剝離乾淨,顱骨直接暴露,否則鑽孔時易損傷鑽頭、骨窗打磨不易控制。2 打磨骨窗時可先用最小的顱骨鑽定位磨一個區域(一個圓圈),方便確定直徑大小,磨骨窗時要有耐心。3 待磨至一點有落空感時,可向其他方向磨,最後向上提起圓圈中間部分,不易造成損硬腦膜損傷。

將T型撞桿置於硬腦膜外,此時不放砝碼,向上調節撞針2-3mm,使得用40g 砝碼從25cm高處沿導管呈自由落體衝擊於T型撞桿時(將擋片突然抽出),可以使得壓縮深度是2-3mm(根據客戶要求),不打穿硬腦膜,造成局部腦挫裂傷,致使衝擊力為1000g/cm(40g×25cm),打擊後,立即從致傷位置解除,以免二次擊傷。

骨蠟封閉骨窗,用乾淨鑷子將一塊骨蠟置於骨窗上,然後用鑷子沿骨窗邊緣向下擠壓(向外擴張)進行封閉。逐層縫合頭皮,用止血鉗夾一下縫合的傷口,酒精棉球擦拭,取下耳桿、大鼠,肌肉注射青黴素抗感染,把動物放回飼養籠內,術後注意保溫。

注意事項:

日常維護:

1 輕拿輕放,避免儀器碰撞而受損。

2 選擇實驗對象不要超過儀器的適用範圍。

3實驗結束後要及時清理儀器,保證其精確性。

實驗過程:

1 首先參照大鼠腦立體定點陣圖譜或者文獻確定腦內注射部位的坐標,包括前囟前或後多少mm,中線左或右多少mm,顱骨下深度為多少mm。

2 麻醉大鼠,然後固定在腦立體定位儀上,主要是固定鼻端和兩耳部位,固定後大鼠的頭部是不能動的,前囟與後囟應位於同一平面,大鼠腦袋不能隆起。

3 剪去大鼠頭頂部毛,皮膚表面消毒,然後根據需要縱向或者橫向剪開皮膚,用棉球和眼科剪刀除去顱骨表面的腦膜,過一會顱骨幹燥後找到前囟部位(靠前部的十字交叉點),以前囟部位為原點,參考定位坐標斤進行手術操作。

本內容來自威斯騰生物


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