同學們，上次給大家介紹了篩選型蛋白互作的研究方法2--TAP-MS的實驗原理和流程，這次介紹的是方法3--BioID。

實驗原理：

BioID的基本原理是將生物素連接酶和誘餌蛋白在目的細胞中融合表達，加入適量的生物素後，與誘餌蛋白互作的或靠得很近的蛋白將被生物素連接酶標記上生物素；之後利用鏈霉親和素純化被生物素標記的蛋白，產物做質譜鑒定，實驗組結果和對照組做比較分析即可獲得誘餌蛋白互作的蛋白。如下圖1所示：

圖1 (Modified fromFirat-Karalar
and Stearns, 2015)

實驗步驟：

BioID實驗的流程包括4個主要步驟，構建生物素連接酶和誘餌蛋白的融合表達載體→融合蛋白在目的細胞中穩定表達→加入適量生物素→生物素化的蛋白經鏈霉親和素和素樹脂（或strep磁珠）純化→洗脫產物做質譜鑒定。

技術的優點和缺點：

優點：BioID鑒定到的互作蛋白是細胞內與誘餌蛋白天然互作的，符合體內真實生理情況，可信度高；弱結合蛋白和瞬時互作蛋白也能被檢測到。

缺點：是不能判斷鑒定到的蛋白是直接還是間接與誘餌蛋白互作的，沒有伯胺的互作蛋白不能被生物素化將無法檢測到。