同学们，上次给大家介绍了筛选型蛋白互作的研究方法2--TAP-MS的实验原理和流程，这次介绍的是方法3--BioID。

实验原理：

BioID的基本原理是将生物素连接酶和诱饵蛋白在目的细胞中融合表达，加入适量的生物素后，与诱饵蛋白互作的或靠得很近的蛋白将被生物素连接酶标记上生物素；之后利用链霉亲和素纯化被生物素标记的蛋白，产物做质谱鉴定，实验组结果和对照组做比较分析即可获得诱饵蛋白互作的蛋白。如下图1所示：

图1 (Modified fromFirat-Karalar
and Stearns, 2015)

实验步骤：

BioID实验的流程包括4个主要步骤，构建生物素连接酶和诱饵蛋白的融合表达载体→融合蛋白在目的细胞中稳定表达→加入适量生物素→生物素化的蛋白经链霉亲和素和素树脂（或strep磁珠）纯化→洗脱产物做质谱鉴定。

技术的优点和缺点：

优点：BioID鉴定到的互作蛋白是细胞内与诱饵蛋白天然互作的，符合体内真实生理情况，可信度高；弱结合蛋白和瞬时互作蛋白也能被检测到。

缺点：是不能判断鉴定到的蛋白是直接还是间接与诱饵蛋白互作的，没有伯胺的互作蛋白不能被生物素化将无法检测到。