色譜柱的填充和老化
要製備一根分離效能較高的色譜柱，必須在載體上塗上一層薄而均勻的液膜，再把塗好的固定相均勻而緊密地裝填到色譜柱管內。因此，固定液的塗漬和色譜柱的裝填使色譜分析重要操作技術之一。這裡主要介紹填充柱。
1、 色譜柱管的試漏和清洗
由於存放、運輸等過程可能將色譜柱管沾污或損壞，使用前應將色譜柱進行試漏與清洗。
試漏的操作方法很簡單，只要將柱管全部浸入水中，將其出口填死，入口通入氮氣，在高於使用的操作壓力下，以壁管沒有氣泡冒出為合格。
清洗的方法，因柱管的材料不同而異。
（1）
玻璃柱管可注入清洗液浸泡兩次（必要時使用溫熱的清洗液，效果更好），然後用子來水沖至中性，再用蒸餾水清洗。清潔的玻璃管內壁不應掛有水珠，否則還要用溫熱的清洗液洗滌，洗後用自來水沖至中性，再用蒸餾水清洗，烘乾後備用。
（2）
對於不鏽鋼柱管，可用5——10%的熱鹼（NaOH或KOH）水溶液抽洗4——5次，以除去壁內的油污，然後用自來水沖洗至中性，再用蒸餾水清洗，烘乾後備用。
（3）
對於銅柱管，可採用10%的鹽酸浸泡，並用水泵抽洗，直至抽洗液中無金屬銅銹或其他懸浮雜質為止，然後用自來水沖至中性，再用蒸餾水清洗，烘乾後備用。
（4）
對於已經用過的色譜柱，需要重換其固定相時，柱管也應當用相應的溶劑（如乙醚、乙醇、熱鹼液）依次洗滌，自來水沖至中性，然後用蒸餾水清洗，以除去柱管中的載體粉末及粘附在管壁上的固定液膜，烘乾後備用。
2、 固定液的塗漬要求
為在載體上塗漬一層薄而均勻的液膜，首先要選好能溶解固定液的溶劑，確保固定液完全溶解，不能有懸浮物，溶劑的本身不應造成檢測器的污染；其次，由於載體強度不高，需避免在塗漬中因攪拌或過篩損壞液膜；第三，如要載體表面或其孔中存有空氣，影響固定液滲入時，可以採用減壓方法，使固定液均勻塗敷在載體表面上。
下面介紹幾種常用的塗漬方法：
（1）「常規」塗漬法。對配比大於5%以上（所謂配比，即固定液與載體的重量比）的固定液，可用「常規」塗漬。其方法是：將一定量的固定液放置在一蒸發皿中，加入適量的溶劑，待固定液溶解後，再加入定量的載體。在一般實驗室的條件下，固定液可藉助溶劑作用塗敷在載體表面上。例如：10%鯊魚烷固定相的製備即可採用「常規」塗漬法。在粗天平上稱取3g的鯊魚烷放在蒸發皿中，在通風櫃中加入能保證完全浸沒載體的乙醚溶劑，使3g鯊魚烷完全溶解後，再徐徐加入30g60——80目的6210載體，固定液在溶劑的作用下塗敷在載體表面上。最後把塗漬上固定液的載體在紅外燈下輕輕攪拌，烘乾並趕走溶劑。一般要求，烘乾後的固定相基本不應有溶劑氣味，這樣才可裝入色譜柱老化後使用。
對於配比高的固定液，「常規」法完全可以滿足其塗漬要求，因為在高溫老化時，固定液還有重新均勻分布的機會。但對於配比小於3%的固定液，由於固定液含量少，剛剛鋪蓋其載體表面時，如果塗漬不均勻，老化也不能完全解決問題，只能採用下述兩種方法塗漬。
（2）抽空盤塗法。在一個蒸發皿或一個盤中，稱取一定量固定液，加入適量的溶劑（合適的量可以按下表大致求出），待其完全溶解後，再加入一定量的載體，將器皿置於真空乾燥器中，接水泵抽空5min，脫氣，然後取出放在通風櫃中，讓溶劑自然蒸發或紅外燈下烘乾，不要攪拌也不要過篩。
各種載體與所需溶劑量
載體 每克載體所需溶劑量
紅色載體 紅色載體
1.5ml 2.0ml
例如，配製20g紅色載體的固定相，需要溶劑的量為20?1.5=30ml。
（3）抽空蒸發法。將一定量的固定液置於圓底燒瓶中，加入適量溶劑，待完全溶解後加入一定量的載體。燒瓶接水泵，並放在水浴上或紅外燈下，一邊抽一邊加熱，可以定時搖動燒瓶使溶劑蒸發至干，然後裝柱使用。
3、 色譜柱的填充
固定相填充的好壞，將直接影響柱能效。通常採用泵抽填充法，即把色譜柱的尾端（注意，即接檢測器的那一端塞上脫脂棉，再接真空泵，色譜柱的前端（即接汽化室的那一端））再接上一個漏斗。在真空的抽提下，不間斷地從漏斗中倒入要裝的固定相，並不斷輕輕敲打色譜柱管，直至固定相不再進入主管為止。裝好的色譜柱兩頭均應按要求堵塞石英棉或硅烷化的玻璃棉，在不影響樣品分析的條件下也可用清潔的鋼網填塞。
4、 色譜柱的老化
裝填好的色譜柱還需要進行老化處理後，才能接至檢測器使用。老化的目的有兩個：（1）為了徹底除去固定相中殘餘溶劑和某些揮發性雜質，確保檢測器不收污染，使之有較低的本底電流；（2）進一步促使固定液均勻地、牢固地分布在載體表面上，可以提高柱效能。老化的方法是：把色譜柱接入載氣氣路系統（為安全起見，一般採用氮氣作載氣），色譜柱的一端接在汽化室上，另一端放空（不要接在檢測器上，防止沾污），用10——20ml/分的載氣流速，略高於操作溫度10°C—20°C（但要低於固定液的最高使用溫度極限）的條件下，通氣4—8h甚至24h。基本老化好後，再接上檢測器檢查。當記錄儀基線平直以後，老化過程才算結束。千萬注意，上述老化色譜柱的接法，不適用於以氫氣作載氣老化，否則氫氣放空在色譜爐中易發生爆炸事故。
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