实验结果：

1.如何判定BSA或myoglobin：由之前的实验可知，BSA的分子量介于50~70kDa之间，myoglobin的分子量为17800Da (电泳出来的讯号接近15000 Da)

2.原理：胶体电泳利用了电性和分子量两种特性。使用SDS令蛋白质带负电，被正电吸引往下跑，通过孔筛时，分子量大者通过较慢，分子量小者较快。

3.问题与讨论：

(1)做胶：我们制作下胶失败6次，前5次上缘总是倾斜，后来发现原因为架胶的器材下方黑色海绵不平整，才导致这个结果；更换器材后解决。

(2)Band粗细及染色：编号5.6.7的蛋白质讯号强度不如11.12，推测为纯化不够，浓度没有编号11.12高，故颜色较淡也较细。

(3)杂讯：在15kDa及50~75kDa其他处亦有讯号(如编号6的band有明显晕开)，可能是管柱层析无法精确排除其他蛋白质所造成。

4.注意事项：

A.架胶时：

(1)玻璃片可先用酒精擦拭，方便之后取下胶体

(2)玻璃必须放在正确位置后方可锁紧，以免玻璃夹碎防

(3)卡楯需检查是否卡紧，防止胶体或buffer外漏

B.制胶时：

(1)30% acylamide solution 具有神经毒，实验环境应通风，倾倒时亦须小心谨慎

(2)TEMED和10%APS最后才加入避免胶体过早凝结，在加入上述两种溶液前须先将pipetment与tips准备好，以利动作迅速

(3)在下胶凝固前可用水将上缘压平

C.电泳时：

(1)不要在两侧load sample，因为干扰较多，讯号会不精确

(2)Buffer的量要足够，避免断电

(3)电泳槽的正负极务必正确，一但接错便不可挽回，须重做实验

(4)电流须视胶片调整(1片25mA；2片50 mA)

(5)通电时，须将提示牙齿位置的塑胶片取下

(6)电泳至距底部1公分时断电

D.封胶时：

(1)使用大量的水，避免气泡产生，尤其胶体附近更要注意

(2)盖上凝膏纸往后折平整，可避免检查是否有气泡时造成干扰

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那个时候架胶架到快中风◢▆▅▄▃崩╰(〒皿〒)╯溃▃▄▅▇◣

居然是那个架子的问题=  =

想说奇怪我们四个人怎么做起来都一样歪

这个实验做好久啊

算了一下我们这组在实验室关了快6个小时

隔壁班更惨烈，有一组做到天黑_(┐「ε:)_

 

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