<细菌接种、分离与培养>

1.实验目的： 微生物通常会与其他细菌混合再一起生长，为了要鉴别和了解个别微生物的特性，就必须单一培养细菌，就是所谓的”pure culture”。

2.实验器材与试剂：agar plates、Loops、酒精灯、菌种：Staphylococcus aureus、 Escherichia coli的agar plate culture、打火机

3.实验步骤： 使用平盘涂布法( Four-way streak plate inoculation)

(1) 将Loop于酒精灯上烧红(至少2/3以上)

 

(2) 等待冷却后沾一点菌

冷却的方法就是在没有涂到菌的地方碰一下，让培养基去帮忙降温，确定不烫了再沾菌

(培养皿平常都是底部朝上，标记也写在底部。底部朝上是为了避免水气滴到菌落上)

这是血液培养基，所以满鲜红的

(3) 左手拿著plate(手掌撑在底部)，盖子半开状，右手持loop以z线来回画至plate2/3处(要轻轻地不能把agar画破)

(4) 重新烧红Loop，冷却后画下一区(不用再去沾菌)，约与第一区重复3至5笔

在照片画过的轨迹不太明显

(5) 第三区与第四区画完后拿到培养箱(37度/24小时，要倒过来放)

(6) 隔天拿出观察

4.实验结果：

Staphylococcus aureus(金黄色葡萄球菌)

Escherichia coli (大肠杆菌)

5.讨论：

Staphylococcus aureus菌：大小约为 1mm的菌落，形状为圆形，有一点点的微隆起，颜色为乳白色不透明， 质感看起来有点像白胶

Escherichia coli菌：大小约为2至3mm的菌落，形状为圆形，有一点隆起，颜色较偏黄，不透明

(1)在进行平盘涂布法，会不小心把agar涂破，因为角度太大导致，后来换了一盘plate再练习有改善。

(2)第一盘的Staphylococcus aureus菌，第四区没有画好，导致菌落没有分很开，应该是空间没有分配好，而且第三区和第四区交叠的笔划数也太少。

(3)第二盘的Escherichia coli菌，分配空间较好，菌落比第一盘好观察。

(4)在进行loop消毒时，要记得把plate的盖子合起来，涂抹时也不要完全把 Plate打开，不然很容易污染检体。

 

<细菌抹片制作及Gram stain>

1.目的：细菌颜色通常是白色或是透明无色，没有染色很难观察，利用细菌的构造和特性染色，可以简单并且迅速进行初步分类，是Gram stain最重要的方法。

2.材料：玻片、loop、needle、水、菌种：Staphylococcus aureus、Escherichia coli的agar  plate culture、crystal violet、Gram’s iodine、 alcohol 95%、Safranin、酒精灯、打火机、显微镜、滤纸

染色用的试剂由右至左(终于知道为什么水槽会这么缤纷了

3.方法：

(1)于玻片上滴一水，拿Loop分成2小滴

(2)使用needle过火消毒后，沾一点Staphylococcus aureus于水滴中，涂抹均匀后再进行消毒，换Escherichia coli同上述步骤

(3)等玻片完全干燥，滴crystal violett反应1分钟，冲洗玻片背面将多余的染剂洗掉，以滤纸吸干多余水分

干掉的样子

不能用嘴巴吹，不然可能喷口水污染xd

滴上结晶紫(crystal violet)

水洗，要冲背面，冲正面就把所有染剂都冲掉了

冲到流下的水不再带紫色就可以了

冲完后轻轻在滤纸上盖一下，把水吸干

(4)使用Gram iodine，同步骤3，再用alcohol 95%把蓝色染剂洗掉(约12 至15秒)

滴上Gram iodine

再用酒精洗掉

(5)水冲玻片背面，滤纸轻轻压干，滴Safranin染45秒，水冲玻片背面

(6)玻片过火约3次直到水分蒸干，于显微镜(油镜)下观察

4.实验结果：

金黄色葡萄球菌

大肠杆菌

5.问题与讨论： Escherichia coli为GNB，颜色红色，大小约为2~3微米，随意排列，通常是一只只杆菌分开

Staphylococcus aureus为GPC，颜色为蓝紫色，大小约为1微米，排列成串，有时候可以看到单独的1~2颗

 

(1)这次的实验中，制作细菌片时要把水涂开，不然干的很慢而且观察时不好看，沾菌只要沾一点点就好。

(2)玻片进行过火时要小心不要被烫到。

(3)染色时尽量轻轻滴染色瓶，太大力会喷染剂。

(4)油镜使用完后要用二甲苯擦干净。

(5)Staphylococcus aureus有些地方有点偏红色，推测是因为Safranin染太久所导致。

---------------------------------------------------------不正经分隔线-------------------------------------------------------------------

这次的报告是哈利鼠写的，有取得哈利鼠同意才放的，我只有稍微加一些照片的说明，内容没改动(但我有改错字哈哈哈

感恩哈利鼠赞叹哈利鼠<3