穩定轉染細胞時，質粒總是丟失，大家有什麼解決方案嗎？

用質粒穩定轉染細胞時，質粒總是丟失，流式細胞儀檢測無信號，大家有什麼解決方案嗎？

不存在穩定轉染這一說法，正確表述為「構建xx穩定表達細胞系」。轉染是一個過程，穩定轉染是在瞬時轉染的基礎上產生的，由於轉入細胞核的質粒有很小的概率整合進宿主的基因組中，所以可以用一些抗生素將這種細胞篩選出來並擴大培養，由於質粒穩定的進入了基因組，所以效果穩定存在。慢病毒載體，只有與輔助載體（包裝載體）共轉染才有可能整合到細胞基因組中，從而穩定表達。最好是加puro葯篩後，種96孔板，篩選出單克隆細胞。單個細胞生長起來的，性狀穩定，不存在質粒丟失一說。如果是未經篩選的細胞，傳代過程中，目的細胞增殖沒有正常細胞快，所佔比例越來越低，讓人產生質粒丟失的錯覺。

加選擇壓

你流式檢測的什麼指標？也可能轉進去但是沒表達呀。。。問題太寬泛了，問個問題不能嚴肅認真點嘛

可否具體一些說一下你用的什麼方法什麼細胞轉的什麼質粒？

lipofectamin 2000，電轉，病毒，病毒+lentiX。

一個一個試過去吧。

是不是改變細胞通透性的溶液稀釋程度過大，所以植入目的基因的噬菌體無法進入細菌，得不到你想要的目的基因。該病毒在人為創造條件下是否有逆轉錄的可能，也有可能是該真核細胞內有抑制病毒逆轉錄的因子。

病毒感染