最近在飼料中提純枯草芽孢桿菌，老師說菌種要90℃水浴10分鐘再塗布，但是每次都沒有菌種長出來，該怎麼辦？

後來我試了一下，不水浴，直接塗布，是可以長出菌落的，這是為什麼呢？

呃芽孢桿菌的話90攝氏度可以很有效的殺死雜菌還有大部分的芽孢桿菌的菌體

可以這麼試試看

飼料提取物可以先用培養基（LB之類的就可以）搖24小時溫度調高一點 45 50的話很多芽孢桿菌是能正常生長的大腸神馬的就燙死了然後超濃的菌懸液（OD600肯定不止1.5了感覺黏糊糊的）放90攝氏度或者沸水加熱十分鐘這個條件下基本上除了孢子沒啥能活下來用做PCR那種低俗的微離轉一下讓上層變成半透明那個可以凍存一部分（孢子能耐冷凍）剩下的再塗板啥的

塗板前要稀釋

塗板前要稀釋塗板前要稀釋以上加油

嗯~首先，你得確定不水浴培養出來的菌落是不是枯草芽孢桿菌，畢竟飼料里提出的嘛，然後枯草芽孢桿菌可能美美的生活在一個物質豐富的環境里，沒有產生芽孢，於是本身數量就不是很多，60度底下長期耐受，100度的時候兩分鐘就損失5%以上，所以十分鐘可能已經死光光啦。當然還有PH不造你調好沒有，不過按說這菌2.2-7.0都行畢竟比較好養活。

總之我猜呢，最有可能的是老師要求的是90度十分鐘殺死其他的菌，然後枯草芽孢桿菌可以產生芽孢抗逆性強，就活下來啦，可是飼料實在是太美味了它們忘記了長芽孢2333我就不羅嗦了。

你的實驗不會就是提純一下枯草芽孢桿菌就完了吧？肯定還有進一步的實驗。提純這一步應該不是什麼太特殊的沒人做過的實驗，那麼可以查查文獻看看別人怎麼做的，尤其是外文文獻。另外，不水浴長出來的菌落，是一種還是好多種？如果是一種，可以鑒定一下是不是你要的（形態、顏色、DNA......）。不是我的專業，瞎想的，呵呵。做實驗，尤其探索性的實驗，具體步驟不一定要完全聽老師的，我做實驗那會兒，老闆只是給個題目，自己查資料，自己寫實驗方案，開題通過以後自己做，有問題問她她也只是給點大框架的意見，具體解決方案還是自己搜。當時覺得很累，現在想想，還是蠻鍛煉人的。

或者可以再設置幾個溫度和時間試試 80度10min之類

首先要搞清楚加熱90℃是為了殺死其他菌群，但是枯草芽孢桿菌到90℃也不容易存活，只有芽孢可以存活，當你塗板時沒死的應該是芽孢，所以只能說明這個飼料里的芽孢量比較少而不能說明沒有枯草芽孢桿菌。我們之前做有機肥也遇到過這種情況，如果你想計數就用DNA含量法幾個數，或者用DGGE看一下飼料里的菌群分布。如果你想把裡面的枯草芽孢桿菌篩出來，那隻能增加塗布濃度了。我做過土壤中芽孢桿菌的篩選，90℃10min是可以篩出芽孢桿菌的，祝你好運

首先，如果飼料中確實是存在枯草芽孢桿菌那麼水浴10分鐘後再進行塗布培養是可以長出菌的因為芽孢桿菌具有很強的抗逆性如短時間的高溫那麼你說的你這樣操作後沒有菌那麼說明幾個問題：1）飼料樣品中的芽孢菌沒有或很少；2）你的培養基是否選擇正確，一般用牛肉膏蛋白腖培養基；3）你的稀釋梯度是否正確。

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如果你不水浴進行塗布有菌落出現那麼你要搞清楚這些菌落是什麼菌因為飼料本身會有一些雜菌如果要長出芽孢桿菌是一定要進行水浴的

謝邀。沒做過芽孢桿菌，一直也沒敢來答。今天下午鏡檢一個環境樣品的時候看到疑似遊離芽孢的東西，想起來跟題主探討一下。非常贊同樓上兩位的回答，想要初步看一下到底有沒有形成芽孢的話，除了用專門的染料孔雀綠，也可以試試用結晶紫簡單染色，如果能看到細胞內有著色較淺近透明的顆粒，或者在細胞外有較小的折光的顆粒，基本上應該可以放心地90℃水浴了。如果沒有，那可能確實是飼料太美味233個人認為，第一次失敗會不會是因為樣品稀釋倍數太大或者不均勻。。。雜菌的問題，其實只要目的菌株長出來了，挑單菌落純化幾次就好了吧。