首先，是否要利用RNA反轉錄得到DNA取決於題主用的是什麼細胞。如果是細菌等原核生物的話，這樣做完全沒有問題；但如果是真核細胞的話，就不能通過直接提DNA的方法來做PCR了。

原因很簡單，在原核生物中，其基因是連續的。在由DNA轉錄得到mRNA後即可直接進行翻譯，無需進一步加工。而在真核細胞中基因大多是斷裂的，一個基因可能由多個內含子（intron）與外顯子（exon）間隔排列構成，且內含子所佔比例較高。

圖1 真核細胞的基因被非編碼序列所間隔

從[1]我們可以看出，位於圖片上方的細菌（原核）細胞中，編碼蛋白質的基因（紅色區段）是連續的，而在圖片下方的真核細胞中，外顯子（紅色區段）是被內含子（橙色區段）分開的。而且

圖2 人β-珠蛋白基因（左）與人Ⅷ因子基因（右）

由[2]可以看出，在一些基因中內含子居然佔據了主要地位。而在轉錄時（以mRNA的轉錄為例），是不會對內含子與外顯子進行區分的，RNA聚合酶只負責將啟動子與終止子間的DNA轉錄為hnRNA（核內不均一RNA，mRNA前體），而後再由pre-mRNA等剪切子剪去內含子，拼接外顯子形成成熟mRNA（見圖3[3]）。

圖3 成熟mRNA的形成過程

所以說，如果想從真核細胞中得到某目的基因的話，只能通過反轉錄對應的mRNA的方法獲取。

另，真核生物tRNA中的內含子由tRNA核酸內切酶切割，並由RNA連接酶將外顯子連接

大多數真核生物rRNA基因中無內含子，但新生RNA前體與蛋白質結合形成的核糖核蛋白前體顆粒須經切割才能形成成熟的rRNA，在此過程中仍涉及RNA的剪切[4]

參考

  1. ^Essential Cell Biology（3rd） Figure7-17
  2. ^Essential Cell Biology（3rd）Figure7-18
  3. ^Lexin Gene X Figure21.1
  4. ^現代分子生物學（第四版）

熒光定量PCR只是一種技術平臺，既可以檢測mRNA的表達變化，也可以檢測基因組DNA的變化。所以要看你的實驗目的。

檢測表達變化自然要先提取RNA再反轉錄成比較穩定的cDNA。

如果你要檢測基因突變（可查詢腫瘤基因檢測相關文章）或者研究某個蛋白結合基因組DNA的情況，就可以提取細胞裏的基因組DNA再做熒光定量。

基因組基因數量就是那些，realtime看的是轉錄水平高低。根據基因的甲基化程度及基因相關的上游轉錄調控機制會導致基因的轉錄效率存在差異，所以看的是rna

首先你要明確qPCR的目的是什麼？

做定量PCR是為了檢測mRNA的表達量，如果提了genomic DNA又有何意義呢？甚至為了區分PCR產物的模板到底來源於genomic DNA還是mRNA，設計qPCR的引物時，還要跨越外顯子的。因為內含子比較大，所以短片段纔是來源於mRNA。

提RNA反轉錄實際測的是mRNA,最終結果表現的是細胞的轉錄水平差異，而提取DNA進行測量實際是基因組定量，最終結果是基因在細胞中的拷貝數。

樓主知道為什麼了嗎 ，我現在也是提取了gDNA 不知道還要不要轉成RNA 在逆轉錄為CDNA 纔可以定量PCR

謝邀，這個問題，建議樓主先踏實學好分子生物學基礎知識…

此外，qPCR只是一項技術，這種提問方式其實在邏輯上是錯誤的，正確的提問方式其實是要定量檢測基因表達為什麼要用熒光定量PCR?

樓主相當於問了一個用剪刀(剪窗花)，為什麼要用囫圇的紙，而不是用一個窗花的模子…

科研不是切碎了一口一口的喂，樓主需要自己通過谷歌，百度，分子生物學書，《基因》應該到12了吧，等當時瞭解以下幾個概念：

1. qRT-PCR的作用。

2. the central dogma

3. DNA RNA和基因表達的關係。

最後告誡樓主，如果真的打算搞科研，自己先踏踏實實的學好基礎，遇見問題先找谷歌百度，像這種問題…說實話，問出來跌份…

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