一. 傳統細胞遷移實驗技術-劃痕實驗

　　基本原理：

　　細胞劃痕（修復）法是簡捷測定細胞遷移運動與修復能力的方法，類似體外傷口癒合模型，在體外培養皿或平板培養的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其它硬物在細胞生長的中央區域劃線，去除中央部分的細胞，然後繼續培養細胞至實驗設定的時間（例如 72 h），取出細胞培養板，觀察周邊細胞是否生長（修復）至中央劃痕區，以此判斷細胞的生長遷移能力。

　　實驗通常需設定正常對照組和實驗組，實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過不同分組之間的細胞對於劃痕區的修復能力，可以判斷各組細胞的遷移與修復能力。

　　操作步驟：

　　先用 marker 筆在 6 孔板背後，用直尺比着，均勻地劃橫線，大約每隔 0.5～1 cm 一道，橫穿過孔，每孔至少穿過 5 條線。

　　在孔中加入約 5 × 105個細胞，具體數量因細胞種類不同而不同，接種原則爲過夜後融合率達到 100%。

　　第二天用槍頭比着直尺，儘量垂至於背後的橫線劃痕，槍頭要垂直，不能傾斜 (不同孔之間最好使用同一只槍頭)。

　　PBS 洗細胞 3 次，去處劃下的細胞，加入無血清培養基。

　　放入 37 ℃ 5% CO2培養箱，培養，可按 0、6、12、24 h 時間點取樣，拍照 (具體時間依實驗需要而定)。

　　統計方法：使用 Image J 軟件打開圖片後，隨機劃取 6 至 8 條水平線，計算細胞間距離的均值。

　　注意事項：

　　在用 PBS 緩衝液沖洗時，貼壁慢慢加入，以免衝散單層貼壁細胞，影響實驗拍照結果。

　　一般做劃痕實驗，都是無血清或者低血清（

　　按照 6 孔板背後畫線的垂直方向劃痕，可以形成若干交叉點，作爲固定的檢測點，以解決了前後觀察時位置不固定的問題。

　　二．傳統實驗方法主要問題

　　傳統實驗方法缺點是細胞增殖對實驗結果有影響，即使在無血清或低血清條件時，細胞的狀態、代謝等方面會受到影響，由於細胞內信號傳導系統整體性的下調，細胞遷移的速度也會慢很多；另外創建「傷口」也可能時大時小，邊緣不整齊等誤差；還有在鏡下拍照觀察時，每次觀察點基本不可能做到完全一致等。

　　三．最新實驗解決方法-傷口癒合劃痕插件

　　可黏附底部；生物相容硅膠材料；8.4 mm x 8.4 mm x 5 mm；兩孔（70 μL / 孔）；每孔生長面積 0.22 cm2；可產生 500 μm 寬的「gap」。

　　特點：

　　在一定程度上模擬了體內細胞遷移的過程。

　　非常適合研究細胞與胞外基質（ECM），細胞與細胞之間相互作用引起的細胞遷移。

　　與包括活細胞成像在內的顯微鏡系統兼容，可用於分析細胞間的相互作用。

　　研究細胞遷移的體外實驗中最簡單的方法。

　　細胞培養插件方法與傳統劃痕實驗比較：

　　細胞培養插件提供重複性更好的實驗結果：左圖是傷口癒合插件做出的實驗數據統計；右圖是槍頭劃痕做出的實驗數據統計。

　　四. 方案小結

　　新型細胞劃痕實驗方法可以保證劃痕的標準化，保證了實驗的重複性-對比槍頭劃痕，劃痕會歪歪扭扭，無法保證每次都一樣；

　　新型細胞劃痕實驗方法可以避免槍頭劃痕會傷到包被，手動劃痕傷到包被的話，會直接影響了細胞遷移的結果；

　　直接鏡檢觀察，成像效果良好；

　　新型細胞劃痕實驗方法有配套的圖像分析，圖像分析是通過計算實驗區域的空白麪積來計算癒合情況的，比分析計算的要更客觀準確；

　　產品用法簡介： 只需要在插件的兩個孔裏種細胞，等細胞貼壁了再拔掉這個插件，細胞之間就會留下一道標準的劃痕，就可以開始定時觀察細胞癒合的情況了；

　　多種規格適合不同的實驗流程，2 孔、3 孔、4 孔，帶培養皿或者插件，細胞追蹤實驗專用插件培養皿等。