pH影響酶的構象，也影響與催化有關基團的解離狀況及底物分子的解離狀態。最適pH有時因底物種類、濃度及緩衝溶液成分不同而變化，不是完全不變的。

溫度也是常見的影響因素。酶活隨溫度變化的曲線也是鐘形曲線，有一個最高點，即最適溫度。溫血動物的酶最適溫度一般是35－40度，植物酶通常在40－50度。這是溫度升高時化學反應加速（每升溫10℃反應速度加快1－2倍）與酶失活綜合平衡的結果。

一般酶在60度以上變性，少數酶可耐高溫，如牛胰核糖核酸酶加熱到100度仍不失活。因為酶的變形過程需要水參與，所以乾燥的酶可耐受高溫，而液態酶失活較快。

最適溫度也不是固定值，它受反應時間影響，酶可在短時間內耐受較高溫度，反應時間延長則最適溫度降低。熱失活的活化能一般為50-100 Kcal/mol，比一般反應的活化能高10倍，所以一般酶在30℃以下是穩定的。

凡是能提高酶活性的物質都稱為激活劑。大部分激活劑是離子或簡單有機化合物。根據無激活劑時酶是否具有活性，可分為必需激活劑和非必需激活劑；根據激活劑分子性質，可分為以下三類：

1.無機離子 可分為金屬離子、氫離子和陰離子三種。可以起激活劑作用的金屬離子有鉀、鈉、鈣、鎂、鋅、鐵等，原子序數在11－55之間，其中鎂是多種激酶及合成酶的激活劑。陰離子的激活作用一般不明顯，較突出的是動物唾液中的α澱粉酶受氯離子激活，溴的激活作用稍弱。

激活劑的作用有選擇性，對另一種酶可能起抑制作用。有些離子還有拮抗作用，如鈉抑制鉀的激活作用，鈣抑制鎂。有些金屬離子可互相替代，如激酶的鎂離子可用錳取代。激活劑的濃度也有影響，濃度過高可能起抑制作用。如對於NADP+合成酶，鎂離子濃度在5-10 mM時起激活作用，在30 mM就會使酶活下降。

2.中等大小有機分子 某些還原劑如半胱氨酸、還原型谷胱甘肽等，可以維持某些酶活性中心的巰基處於還原態，從而提高酶活，如木瓜蛋白酶、磷酸甘油醛脫氫酶等。另一種是EDTA，可螯合金屬，解除重金屬對酶的抑制作用。

3.蛋白質類指可對某些無活性的酶原起作用的酶，即酶原激活作用。

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