是否存在一小群crRNAs可以針對所有已完全測序的IAV菌株。作者分析了91600株具有完整片段序列的菌株,以識別所有可能的crRNAs,並對這個列表進行了細化,以定義儘可能多的IAV基因組目標的crRNAs的最小數量。分析顯示,一組6個crRNAs可以靶向91%的已測序的冠狀病毒,以及一組22個crRNAs可以靶向所有已測序的冠狀病毒。通過使用針對同一病毒的不同區域或不同菌株的冠狀病毒的crRNA池,該系統可能緩衝病毒進化和逃逸,並用於保護未來相關致病病毒。
1:可以用來在體內表達PAC-MAN組件開發有效和安全的體內給藥方法:Cas13d及其同源crRNAs可以在化學聚合物或脂質納米顆粒(LNPs)中以RNA形式傳遞;另一種策略是提供含有與crRNAs組裝的Cas13d蛋白的核糖核蛋白複合物;自組裝的肽-波洛沙胺納米顆粒可遞送mRNA或質粒DNA。預期上述策略中的一種可以通過噴霧器系統或鼻腔噴霧劑作為抗病毒策略應用於患者或健康人群。
2:在臨床中使用PAC-MAN需要克服幾個技術上的限制:PACMAN以細胞自主的方式發揮作用,這意味著只有表達Cas13d和crRNAs的細胞才直接受到保護,免受目標病毒的攻擊。要使PAC-MAN在患者中有效,它需要能夠在一定比例的細胞中充分表達,其範圍需要通過實驗確定。因為RNA基因組的二級結構或保護層蛋白質,病毒基因組可能不太容易受到抑制。為了解決這個問題,高通量的crRNAs篩選可能有助於識別針對SARS-CoV-2的高效crRNAs。